洗涤在ELISA过程中决定着实验的成败

洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中，洗涤是zui主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。

在小鼠ELISA试剂盒操作中，洗涤是zui主要的关键技术，操作时尤为注意：保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板後在吸水纸或毛巾（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干（若使用易掉渣的纸，纸屑会留在板孔中，由于纸屑中含有氧化剂而造成高值阴性。）；  
上海劲马生物提醒大家注意各种试剂盒的洗液不要混用。
如果洗液需要稀释，应按要求稀释，所用的水电导率在1.5us/cm 之下，洗液如果结晶应待其融解後配制。室温温育的试剂，特别是温育时间比较短的实验操作的试剂，加样对数据的影响比较大。特别要注意加样问题。  

不好的操作原因：不会正确使用加样器；血清或血浆标本分离不好即进行加样；  
手工操作中，加样板过多造成加样後放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)；  加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外；小鼠ELISA试剂盒解决办法：熟悉加样器的使用，在进行实验之前用水来练习加样的快速和准确；试验前标本需缓慢升温至室温，若标本为血清，冻结血清融解後，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离或过滤，澄清後再检测；  
加样时应将所加物加在小鼠ELISA试剂盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出；加样後及时放入孵箱；加酶试剂後用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干；  
如果采用AT或其他全自动加样，选择小鼠ELISA试剂盒或其他後处理仪器加酶试剂；  
标本较多时，请分批操作。每次加样在两到三分钟内完成。加标本时三排一加。每次加完样进行计时； 
参考小鼠ELISA试剂盒#加样  
温 育：  
温育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*；  
温育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。